22.41
Akhmad Andy Sandra
LAPORAN
PRAKTIKUM FARMAKOGNOSI II
Disusun
Oleh :
Nama NIM
Resdha Arini 723901S.12.093
Ria Indriani 723901S.12.094
Rike Wigati 723901S.12.095
Risfi Herista 723901S.12.096
Riska Ayu Wulan Dira 723901S.12.097
Rismayanti 723901S.12.098
Riyan Saparida 723901S.12.099
Rizki Permatasari 723901S.12.100
Sadatunnisa 723901S.12.101
Titin Hartini 723901S.12.102
Tresensia Herni 723901S.12.103
Syarifah Shahnaz F. N. 723901S.11.091
Dosen
Pembimbing :
Anita
Apriliana, S.Si., M.Pharm., Apt
AKADEMI
FARMASI SAMARINDA
LABORATORIUM
TERPADU II
2014
BAB
I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Sirsak
(Annona muricata L) merupakan salah
satu tanaman buah yang berasal dari Karibia, Amerika Tengah dan Amerika
Selatan, buah sirsak rasanya manis agak asam sehingga sering dipakai sebagai
bahan jus buah. Daging buahnya kaya akan serat. Setiap 100 g buah yang dapat
dimakan mengandung 3,3 g serat sehingga dapat memenuhi 13% kebutuhan serat per
hari. Selain itu, daging buahnya mengandung banyak karbohidrat (terutama
fruktosa), vitamin C (20 mg/100 g), B1 dan B2.
Awal
tahun 90-an ditemukan semacam “jamu herbal” dari suku-suku (tribes) di Amazon
yang dapat menyembuhkan beberapa termasuk kanker. Setelah diteliti oleh para
ahli farmasi dari AS, ternyata ramuan tersebut berasal dari daun pohon
Graviola.Daun tersebut mengandung zat anti-kanker yang disebut acetogenins, yang dapat membunuh sel-sel
kanker tanpa mengganggu sel-sel sehat dalam tubuh manusia.
Acetagonins
adalah senyawa polyketides dengan
struktur 30-32 rantai karbon tidak bercabang yang terikat pada gugus 5-methyl-2-furanone.Rantai furanone dalam gugus hydrofuranone pada C23 memiliki
aktivitas sitotoksik.Annonaceous
acetogenin bekerja dengan menghambat produksi ATP dengan mengganggu komplek
1 mitokondria.Saat ini, pemanfaatan senyawa acetagonins
sebagai obat hanya sebatas dengan meminum rebusan daun sirsak saja, dan saat
ini tidak ada acetagonins yang dijual
dipasaran.Dilihat dari fungsinya, acetagonins
mempunyai peluang ekonomi tinggi untuk diproduksi.
Salah
satu kendala dalam pemanfaatan ekstrak daun sirsak adalah kurang efisiennya
pelarut yang digunakan selama ini.Oleh karena itu dilakukan isolasi acetogenins merupakan pelarut polar.
Daun sirsak (Annona muricata L)
adalah tanaman yang mengandung tannin, Keuntungan menggunakan metode maserasi
adalah cara pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana dan mudah
diusahakan. Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan dengan menggunaakn metode
maserasi.Selanjutnya ekstrak yang diperoleh dapat digunakan untuk penelitian
skrining fitokimia, ekstraksi cair-cair dan kromatografi lapis tipis.
1.2 Tujuan
1.
Mahasiswa diharapkan mampu membuat pereaksi,
serta mengidentifikasi senyawa metabolit sekunder yaitu senyawa golongan
alkaloid, saponin, flavonoid, tannin dan polifenol, terpenoid dan fenolat.
2. Mahasiswa
diharapkan mampu melakukan proses ekstraksi metabolit sekunder dari
tanaman/tumbuhan dengan beberapa metode ekstraksi, serta memahami prinsip
ekstraksi metode maserasi.
3. Mahasiswa
diharapkan mampu melakukan pemisahan (partisi) senyawa metabolit sekunder yang
terkandung dalam ekstrak berdasarkan pada perbedaan kepolaran pelarut dengan
metode ekstraksi cair-cair.
4. Mahasiswa
diharapkan mampu memahami prinsip dari KLT, menentukan fase gerak dan fase
diam, melakukan preparasi sampel dan menotolkan sampel ke fase diam, serta
mampu mengidentifikasi senyawa metabolit sekunder dengan mengunakan pereaksi
semprot.
1.3 Manfaat
Mahasiswa mampu melakukan
pengujian skrining fitokimia pada suatu tanaman, mampu melakukan proses
ekstraksi metabolit sekunder dari tanaman/tumbuhan dengan metode maserasi, mampu
melakukan pemisahan (partisi) dengan metode ekstraksi cair-cair, serta mampu
memahami prinsip dari KLT dan mengidentifikasi senyawa metabolit sekunder.
BAB
II
DASAR
TEORI
2.1 Uraian Tanaman
2.1.1
Morfologi
Daun sirsak adalah daun Annona muricata L., suku
Annonaceae. Pemerian.Daun berbau agak keras; rasa agak kelat.
Makroskopik. Daun tunggal, warna kehijauan sampai
hijau kecoklatan; helaian daun seperti kulit, bentuk bundar panjang,lanse atau
bundar telur terbalik, panjang helaian daun 6 cm sampai 18 cm, lebar 2 cm
sampai 6 cm. Ujung daun meruncing pendek,pangkal daun meruncing, tepi rata;
panjang tangkai daun lebih kurang 0,7 cm. Permukaan licin agak mengkilat,
tulang daun menyirip, ibu tulang daun menonjol pada permukaan bawah.
Mikroskopik. Pada penampang melintang melalui tulang
daun tampak sel epidermis atas bentuk empat persgi panjang dengan dinding
bergelombang; kulikula tebal; sel epidemis bawah lebih kecil dari pada
epidermis atas, bentuk tidak beraturan dengan dinding bergelombang, terdapat
stomata; rambut penutup bentuk lurus , terdiri dari 2 sel sampai 3 sel, ujung
tumpul. Mesofil meliputi jaringan palisade terdiri dari 1 lapis sel,
diantaranya terdapat sel sekresi, jaingan bungavkarang terdiri dari beberapa
lapis sel, diantaranya terdapat ruang
antar sel yang lebar dan terdapat sel sekresi. Pada tulang daun terdapat bekas pembuluh tipe korateral, diantaranya,
diantaranya terdapat jari-jari xilem; berkas pembuluh dikelilingi oleh serabut;
juga terdapat parenkim bernoktah dan sel sel batu berdinding sel tebal;
kolenkim terdapat pada bagian bawah tulang daun, terdiri atas dua lapis sel.
Pada sayatan paradermal epidermis atas
bentuk tidak beraturan dengan dinding bergelombang, tidak terdapat
stomata; epidermis bawa hampir sama dengan epidermis atas, bentuk tidak
beratura dengan dinding berelombang dengan stomata tipe anomositik; rambut
penutup panjang, terdiri dari dua sampai tiga sel, dinding tebal, lumen lebar
fragmen pembuluh kayu dengan penebalan tangga sel satu bundar, lumen kecil,
bernoktah; fragmen mesofil dengan palisade; mesofil dengan sel sekresi bentuk
bundar dinding tebal; fragmen parenkim bernoktah.
2.1.2
Sistematika
Klasifikasi tumbuhan sirsak sebagai berikut :
Kingdom : Plantae (Tumbuhan)
Subkingdom : Tracheobionta (Tumbuhan
berpembuluh)
Super Divisi : Spermatophyta (Menghasilkan biji)
Divisi : Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)
Kelas : Magnoliopsida (berkeping dua/dikotil)
Sub Kelas : Magnolidae
Ordo :
Magnoliales
Famili : Annonaceae
Genus : Annona
Spesies : Annona muricata L.
2.1.3
Nama Daerah
Sumatera
; Deureuyan belanda (Aceh); tarutung olanda (Batak); durio ulondra (Nias), durian belanda, nangka walanda (Melayu),
durian betawi, duian betawi (Minangkabau); jambu landa (Lampung). Jawa : Nangkawalanda (Sunda); angka
londa, nangkamanila, nangka sabrang, molwa londa, surikaya welonda, srikaya
welandi (Jawa); nangka buris, nangka englan, nangka moris (Madura). Bali : Srikaya jawa. Nusatenggara : naka , nakat, annona (Flores).
Sulawesi : atis, mangka walanda
(Sulawesi Utara), lange lo walanda (Gorontalo); srikaya belanda (Makasar);
srikaya belanda(Bugis). Maluku : Anad
walanda , tafena warata (Seram); anaal wakano (Nusa Laut); naka loanda (Buru);
durian, naka wolanda (Halmahera); naka walanda (Ternate); naka lada (Tidore).
2.1.4 Kandungan Kimia
Daun sirsak mengandung senyawa acetogenin, minyak
esensial, reticuline,
loreximine, coclaurine,
annomurine, higenamine.Buah
sirsak mengandung banyak karbohidrat,
terutama fruktosa.Kandungan
gizi lainnya adalah vitamin C, vitamin B1
dan vitamin B2
yang cukup banyak.Biji bersifat racun dan dapat digunakan sebagai insektisida
alami, seperti juga biji srikaya.
2.1.5
Khasiat
Daun sirsak bermanfaat menghambat sel kanker dengan
menginduksi apoptosis, antidiare, analgetik, anti disentri, anti asma,
anthelmitic, dilatasi pembuluh darah, menstimulasi pencernaan, mengurangi
depresi (McLaughlin, 2008).
2.2 Uraian Kandungan Kimia
Tumbuhan
1. Alkaloida
Alkaloida merupakan
golongan zat tumbuhan sekunder yang terbesar.Alkaloida mencakup senyawa
bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen, biasanya dalam
gabungan sebagai bagian dari sistem siklik.Alkaloida mempunyai aktivitas
fisiologi yang menonjol sehingga digunakan secara luas dalam bidang pengobatan
(Harborne, 1987).
Ada tiga pereaksi yang
sering digunakan dalam skrining fitokimia untuk mendeteksi alkaloida sebagai
pereaksi pengendapan yaitu pereaksi Mayer, pereaksi Bouchardat, dan pereaksi
Dragendorff (Farnsworth, 1966).
2. Flavonoida
Flavonoida mencangkup
banyak pigmen yang paling umum dan terdapat pada seluruh dunia tumbuhan mulai
dari fungus sampai angiospermae.Pada tumbuhan tinggi, flavonoida terdapat baik
dalam bagian vegetatif maupun dalam bunga.Pigmen bunga flavonoida berperan
jelas dalam menarik burung dan serangga penyerbuk bunga.Beberapa fungsi
flavonoida pada tumbuhan ialah pengatur tumbuh, pengatur fotosintesis, kerja
antimikroba dan antivirus serta kerja terhadap serangga (Robinson, 1995).
3. Saponin
Saponin mula-mula diberi nama demikian
karena sifatnya yang menyerupai sabun (bahasa latin sapo berarti sabun).
Saponin tersebar luas diantara tanaman tinggi.Saponin merupakan senyawa berasa
pahit, menusuk, menyebabkan bersin dan mengakibatkan iritasi terhadap selaput
lendir.Saponin adalah senyawa aktif permukaan yang kuat yang menimbulkan busa
jika dikocok.
Dalam larutan yang sangat encer saponin
sangat beracun untuk ikan, dan tumbuhan yang mengandung saponin telah digunakan
sebagai racun ikan selama beratus-ratus tahun (Robinson, 1995: Gunawan, et
al, 2004).
4. Tanin
Tanin merupakan salah satu
senyawa yang termasuk ke dalam golongan polifenol yang terdapat dalam tumbuhan,
yang mempunyai rasa sepat dan memiliki kemampuan menyamak kulit.Tanin terdapat
luas dalam tumbuhan berpembuluh, dalam angiospermae terdapat khusus dalam
jaringan kayu (Harborne, 1987).
Umumnya tumbuhan yang
mengandung tanin dihindari oleh pemakan tumbuhan karena rasanya yang
sepat.Salah satu fungsi tanin dalam tumbuhan adalah sebagai penolak hewan
pemakan tumbuhan (herbivora) (Harborne, 1987).
5. Glikosida
Glikosida
adalah senyawa yang terdiri atas gabungan gula dan bukan gula.Bagian gula biasa
disebut glikon sementara bagian bukan gula disebut aglikon atau genin (Gunawan,
et al, 2002).
6. Glikosida Antrakuinon
Golongan kuinon alam
terbesar terdiri atas antrakuinon.Beberapa antrakuinon merupakan zat warna
penting dan sebagai pencahar. Keluarga tumbuhan yang kaya akan senyawa jenis
ini adalah Rubiaceae, Rhamnaceae, Polygonaceae.
Antrakuinon biasanya
berupa senyawa kristal bertitik leleh tinggi, larut dalam pelarut organik
biasa, senyawa ini biasanya berwarna merah, tetapi yang lainnya berwarna kuning
sampai coklat, larut dalam larutan basa dengan membentuk warna violet merah
(Robinson, 1995).
7. Steroid/Triterpenoid
Triterpenoid adalah
senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari enam satuan isoprena dan secara
biosintesis diturunkan dari hidrokarbon C30 asiklik, yaitu skualen. Triterpenoid
adalah senyawa tanpa warna, berbentuk kristal, sering kali bertitik leleh
tinggi dan aktif optik. Uji yang banyak digunakan ialah reaksi Liebermann –
Burchard (asam asetat anhidrida – H2SO4 pekat)
yang kebanyakan triterpena dan sterol memberikan warna hijau biru.Steroida
adalah triterpena yang kerangka dasarnya sistem cincin siklopentana
perhidrofenantren (Harborne, 1987).dapat dilihat pada gambar 2 berikut ini :
Gambar
1.Struktur
dasar steroida dan sistem penomorannya
Dahulu steroida dianggap sebagai senyawa satwa tetapi
sekarang ini makin banyak senyawa steroida yang ditemukan dalam jaringan
tumbuhan (fitosterol).Fitosterol merupakan senyawa steroida yang berasal dari
tumbuhan.Senyawa fitosterol yang biasa terdapat pada tumbuhan tinggi yaitu
sitosterol, stigmasterol, dan kampesterol (Harborne, 1987).
2.3
Metode Ekstraksi Maserasi
Maserasi merupakan cara penyarian yang sederhana. Maserasi dilakukan dengan
cara merendam serbuksimplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari akan
menembus dinding sel dan masuk kedalam rongga sel yang mengandung zat aktif,
zat aktif akan larut dan karna adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat
aktif di dalam sel dengan yang di luar sel, maka larutan yang terpekat didesak
keluar. Peristiwa tersebut berulang sehingga terjadi keseimbangan konsentrasi
antara larutan diluar sel dan di dalam sel.
Maserasi digunakan untuk penyarian simplisia yang mengandung zat aktif yang
mudah larut dalam cairan penyari, tidak mengandung zat yang mudah mengembang
dalam cairan penyari, tidak mengandung benzoin, dan lain-lain.
Cairan penyari yang digunakan dapat berupa air, etanol, air-etanol atau
pelarut lain. Bila cairan penyari digunakan air maka untuk mencegah timbulnya
kapang, dapat ditambahkan bahan pengawet, yang akan dibrikan pada awal
penyarian.
Kerugian cara maserasi adalah pengerjaannya lama dan penyaringan kurang
sempurna.
Maserasi pada umumnya dilakukan dengan cara: 10 bagian simplisia dengan derajat halus yang cocok dimasukkan kedalam bejena,
kemudian dituangi dengan 75 bagian caira penyari, ditutup dan dibiarkan selama
5 hari terlindungi dari cahaya,sambil diulang-ulang diaduk.Setelah 5 hari diserkai, ampas diperas. Ampas ditambah cairan penyari secukupnya
diaduk dan diserkai, sehingga diperoleh seluruh sari sebanyak 100 bagian.
Benjena ditutup, dibiarkan ditempat sejuk, terlindungi dari cahaya, selama 2
hari kemudian endapan dipisahkan.
Maserasi dapat dilakukan modifikasi
misalnya:
1.
Degesti
Degesti adalah cara maserasi dengan menggunakan pemanasan
lemah, yaitu pada suhu 40o-50o
C. Cara maserasi ini hanya dapat dilakukan untuk simplisia yang zat aktifnya
tahan terhadap pemanasan.
2.
Maserasi dengan mesin pengaduk
Penggunaan mesin pengaduk yang berputar terus menerus
waktu peroses maserasi dapat dipersingkat menjadi 6 sampai 24 jam.
3.
Remaserasi
Cairan penyari dibagi 2. Seluruh serbuk simplisia dimaserasi
dengan cairan penyari pertama, sesudah diendapkan tuangkan
dan diperas, ampas dimaserasi lagi dengan cairan penyari yang kedua.
4.
Maserasih melingkar
Maserasi dapat diperbaiki dengan mengusahakan agar cairan
penyari selalu bergerak dan menyabar. Dengan cara ini penyari selalu mengalir
kembali secara berkesinambungan melalui serbuk simplisia dan melarutkan zat
aktifnya. Cairan pencari ini dipompa dari bawah bejana penyari.peroses ini
dilakukan berulang-ulang,sehingga penyari jenuh terhadap zat aktif.
Keuntungan cara ini:
1.
aliran cairan penyari mengurangi lapisan bata
2.
cairan penyari akan didistribusikan secara
seragam, sehingga akan memperkecil kepekatan setempat
3.
waktu yang diperlukan lebih pendek.
5. Maserasi melingkar
bertingkat
Pada maserasi melingkar penyarian tidak dapat
dilaksanakan secara sempurna, karena pemindahan massa akan berhenti bila
keseimbangan telah terjadi. Masalah ini
dapat diatasi dengan maserasi melingkar bertingkat (M.M.B).
2.4 Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia merupakan
tahappendahuluan dalam suatu penelitian fitokimiayang bertujuan untuk
memberikan gambarantentang golongan senyawa yang terkandungdalam tanaman yang
sedang diteliti. Metodeskrining fitokimia dilakukan dengan melihatreaksi
pengujian warna dengan menggunakansuatu pereaksi warna. Hal penting yang
berperanpenting dalam skrining fitokimia adalahpemilihan pelarut dan metode
ekstraksi(Kristianti dkk., 2008).
Skrining fitokimia atau penapisan kimia adalah tahapan awal untuk
mengidentifikasi kandungan kimia yang terkandung dalam tumbuhan, karna pada
tahap ini kita bisa mengetahui golongan senyawa kimia yang dikandung tumbuhan
yang sedang kita uji/teliti.
Metode yang digunakan dalam skrining fitokimia harus memiliki
persyaratan :
·
metodenya sederhana dan cepat
·
selektif dalam mengidentifikasi senyawa-senyawa
tertentu
·
dapat memberikan informasi tambahan mengenai
keberadaan senyawa tertentu dalam kelompok senyawa yang diteliti.
Golongan senyawa kimia dapat ditentukan dengan
cara:
·
uji warna
·
penentuan kelarutan
·
bilangan Rf
·
ciri spektrum UV
·
namun secara umum penentuan golongan senyawa kimia
dilakukan denga cara uji warna dengan menggunakan pereaksi yang spesifik karena
dirasakan lebih sederhana.
Senyawa kimia berdasarkan asal biosintesis, sifat kelarutan, gugus
fungsi digolongkan menjadi :
·
Senyawa fenol, bersifat hidrofil, biosintesisnya
berasal dari asam shikimat
·
terpenoid, berasal dari lipid, biosintesisnya
berasal dari isopentenil pirofosfat
·
asam organik, lipid dan sejenisnya, biosintesisnya
berasal dari asetat
·
senyawa nitrogen, bersifat basa dan bereaksi
positif terhadap ninhidrin atau dragendorf
·
gula dan turunannya
·
makromolekul, umumnya memiliki bobot molekul yang
tinggi
Sedangkan berdasarkan biogenesisnya senyawa bahan alam dikelompokkan
menjadi :
·
Asetogenin : flavonoid, lipid, lignan, dan kuinon
·
karbohidra : monosakarida, oligosakarida, dan
polisakarida
·
isoprenoid : tepenoid, steroid, karotenoid
·
senyawa mengandung nitrogen : alkaloid, asam amino,
protein, dan nukleat
Dari semua kelompok senyawa, skrining fitokimia umumnya hanya dilakukan
terhadap kelompok senyawa fenol,
terpenoid, dan senyawa nitrogen.
1.
senyawa fenol
Senyawa
fenol ditandai dengan struktur cincin aromatik yang mengandung satu atau dua
penyulih hidroksil.cendrung mudah larut dalam air, contoh senyawa : polifenol,
flavonoid, tanin dan quinon.
2.
senyawa terpenoid
Terpenoid
tersusun dari molekul unit isoprena (C5), digolongkan berdasarkan jumlah
isoprena dari senyawa tersebut, seperti: monoterpen, dua isopren (C10), tiga
isopren (C15), empat (C20), C25, C30, C35, C40 :
·
monoterpen (C10) dan seskuiterpen (C15) : mudah
menguap, komponen minyak atsiri
·
diterpen (C20) : lebih sukar menguap
·
triterpen (C30) : sterol dan saponin (senyawa yang
tidak menguap)
·
pigmen karetonoid : tetraterpenoid (C40)
3.
senyawa nitrogen
Senyawa
nitrogen yang ada pada tumbuhan seperti : asam amino, amina, alkaloid,
glikosida, sianogen, porfirin, purin, piridin, sitokinin dan klorofil (pigmen
porifirin), tetapai kelah terbesar dari senyawa nitrogen adalah alkaloid.
Masalah pada skrining fitokimia biasanya adalah kesalahan menafsirkan
hasil analisis pengujian/skrining, seperti :
·
reaksi positif palsu adalah
hasil pengujian menyatakan ada (positif), tapi sebenarnya tidak ada (negatif),
hal ini bisa disebabkan kesalahan alat, atau pengaruh senyawa yang memiliki
kesamaan sifat maupun struktur atom yang identik
·
reaksi negatif palsu adalah hasil
pengujian menyatakan tidak ada (negatif), tapi sebenarnya ada (positif), hal
ini bisa disebabkan kurang sensitifnya alat, atau karena kadar didalam bahan
uji terlalu sedikit, atau bahan ujinya (ekstrak simplisia) tidak memenuhi
syarat, oleh karena itu senyawa yang tadinya ada hilang/rusak karna reaksi enzimatik maupun
hidrolisis.
2.5 Ekstraksi Cair-Cair
Pada ekstraksi
cair-cair, zat yang diekstraksi terdapat didalam campuran yang berbentuk
cair.Ekstraksi cair-cair sering juga disebut ekstraksi pelarut, banyak
dilakukan untuk memisahkan zat seperti iod, atau logam-logam tertentu dalam
larutan air.
Ekstraksi cair-cair
digunakan sebagai cara untuk memperlakukan sampel atau clean-up sampel untuk
memisahkan analit-analit dari komponen matrix yang mungkin menggangu pada saat
kuantifikasi atau deteksi analit. Disamping itu, ekstraksi pelarut juga digunakan
untuk memekatkan analit yang ada didalam sampel dalam jumlah kecil sehingga
tidak memungkinkan atau menyulitkan untuk deteksi dan kuantifikasinya.Salah
satu fasenya seringkali berupa air dan faes yanglain pelarut organik seperti
kloroform atau petroleum eter.
Senyawa-senyawa yang
bersifat polar akan ditemukan didalam fase air,sedangkan senyawa-senyawa yang
bersifat hidrofobik akan masuk pada pelarut anorganik. Analit yang tereksasi
kedalam pelarut organik akan mudah diperoleh kembali dengan cara penguapan
pelarut, sedangkan analit yang masuk kedalam fase air seringkali diinjeksikan
secara langsung kedalam kolom.
Hubungan zat terlarut
yang terdistribusi diantara dua pelarut yang tidak saling bercampur dinyatakan
pertama kali oleh “"Walter nernst "” (1981) yang dikenal dengan
hukum distribusi atau partisi “jika solut dilarutkan sekaligus kedalam
dua pelarut yang tidak saling bercampur, maka solut akan terdistribusi diantara
kedua pelarut. Pada saat setimbang perbandingan konsentrasi solut berharga tetap
pada suhu tetap.”
Pada ekstraksi
cair-cair, satu komponen bahan atau lebih dari suatu campuran dipisahkan dengan
bantuan pelarut. Proses ini digunakan secara teknis dalam skala besar misalnya
untuk memperoleh vitamin, antibiotika, bahan-bahan penyedap, produk-produk
minyak bumi dan garam-garam. logam. Proses inipun digunakan untuk membersihkan
air limbah dan larutan ekstrak hasil ekstraksi padat cair.
Ekstraksi cair-cair
terutama digunakan, bila pemisahan campuran dengan cara distilasi tidak mungkin
dilakukan (misalnya karena pembentukan aseotrop atau karena kepekaannya
terhadap panas) atau tidak ekonomis. Seperti ekstraksi padat-cair, ekstraksi
cair-cair selalu terdiri atas sedikitnya dua tahap, yaltu pencampuran secara
intensif bahan ekstraksi dengan pelarut, dan pemisahan kedua fasa cair itu
sesempurna mungkin.
Pada saat pencampuran
terjadi perpindahan massa, yaitu ekstrak meninggalkan pelarut yang pertarna
(media pembawa) dan masuk ke dalam pelarut kedua (media ekstraksi). Sebagai
syarat ekstraksi ini, bahan ekstraksi dan pelarut tidak saling melarut (atau
hanya dalam daerah yang sempit).Agar terjadi perpindahan masa yang baik yang
berarti performansi ekstraksi yang besar haruslah diusahakan agar terjadi
bidang kontak yang seluas mungkin di antara kedua cairan tersebut. Untuk itu
salah satu cairan distribusikan menjadi tetes-tetes kecil (misalnya dengan
bantuan perkakas pengaduk).Tentu saja pendistribusian ini tidak boleh terlalu
jauh, karena akan menyebabkan terbentuknya emulsi yang tidak dapat lagi atau
sukar sekali dipisah.
Turbulensi pada saat
mencampur tidak perlu terlalu besar. Yang penting perbedaan konsentrasi sebagai
gaya penggerak pada bidang batas tetap ada. Hal ini berarti bahwa bahan yang
telah terlarutkan sedapat mungkin segera disingkirkan dari bidang batas. Pada
saat pemisahan, cairan yang telah terdistribusi menjadi tetes-tetes hanis
menyatu kembali menjadi sebuah fasa homogen dan berdasarkan perbedaan kerapatan
yang cukup besar dapat dipisahkan dari cairan yang lain.
Berbagai jenis metode
pemisahan yang ada, ekstraksi pelarut atau juga disebut juga ekstraksi air
merupakan metode pemisahan yang paling baik dan popular.Pemisahan ini dilakukan
baik dalam tingkat makro maupun mikro.
Prinsip distribusi ini
didasarkan pada distribusi zat terlarut dengan perbandingan tertentu antara dua
zat pelarut yang tidak saling bercampur.Batasannya adalah zat terlarut dapat
ditransfer pada jumlah yang berbeda dalam kedua fase terlarut. Teknik ini dapat
digunakan untuk kegunaan preparatif, pemurnian, pemisahan serta analisis pada
semua kerja.Berbeda dengan proses retrifikasi, pada ekstraksi tidak terjadi
pemisahan segera dari bahan-bahan yang akan diperoleh (ekstrak), melainkan
mula-mula hanya terjadi pengumpulan ekstrak (dalam pelarut).
Suatu proses ekstraksi
biasanya melibatkan tahap-tahap berikut:
1.
Mencampurkan
bahan ekstrak dengan pelarut dan membiarkannya saling kontak. Dalam hal ini
terjadi perpindahan massa dengan cara difusi pada bidang antar muka bahan
ekstraksi dan pelarut. Dengan demikian terjadi ekstraksi yang sebenarnya, yaitu
pelarut ekstrak.
2.
Memisahkan
larutan ekstrak dari refinat, kebanyakan dengan cara penjernihan atau filtrasi.
3.
Mengisolasi
ekstrak dari larutan ekstrak dan mendapatkan kembali pelarut. Umumnya dilakukan
dengan mendapatkan kembali pelarut. Larutan ekstrak langsung dapat diolah lebih
lanjut atau diolah setelah dipekatkan.
2.6 Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Kromatografi lapis tipis (KLT) adalah suatu tehnik yang sederhana
dan banyak digunakan.Metode ini menggunakan lempeng kaca atau lembaran plastik
yang ditutupi penyerap untuk lapisan tipis dan kering bentuk silika gel,
alomina, selulosa dan polianida.Untuk menotolkan larutan cuplikan pada lempeng
kaca, pada dasarnya dgunakan mikro pipet/ pipa kapiler.Setelah itu, bagian
bawah dari lempeng dicelup dalam larutan pengulsi di dalam wadah yang tertutup (Rudi,
2010).
Pemisahan campuran dengan cara kromatografi didasarkan pada
perbedaan kecepatan merambat antara partikel-partikel zat yang bercampur pada
medium tertentu. Dalam kehidupan sehari-hari pemisahan secara kromatografi
dapat kita temui pada rembesan air pada dinding yang menghasilkan garis-garis
dengan jarak tertentu.
Tinta hitam merupakan campuran beberapa warna. Kita dapat
memisahkan campuran warna tersebut dengan cara kromatografi. Pemisahan warna
tinta dapat dilakukan dengan cara :
·
Tinta diteteskan pada ujung kertas saring (1,5
cm dari ujung)
·
Tinta dibiarkan hingga mongering
·
Ujung kertas saring dimasukkan dalam air
sedalam 1 cm dan kertas saring dipasang tegak
·
Air akan merambat naik
·
Tinta akan ikut merambat naik dan memisah
menjadi beberapa Warna ( Sukarmin , 2004).
Penentuan jumlah komponen senyawa dapat dideteksi dengan
kromatografi lapis tipis (KLT) dengan menggunakan plat KLT yang sudah siap
pakai. Terjadinya pemisahan komponen-komponen pada KLT dengan Rf tertentu dapat
dijadikan sebagai panduan untuk memisahkan komponen kimia tersebut dengan
menggunakan kolom kromatografi dan sebagai fasa diam dapat digunakan silika gel
dan eluen yang digunakan berdasarkan basil yang diperoleh dari KLT dan akan
lebih baik kalau kepolaraan eluen pada kolom kromatografi sedikit dibawah
kepolaran eluen pada KLT (Lenny, 2006).
Pada hakekatnya KLT merupakan metoda kromatografi cair yang
melibatkan dua fasa yaitu fasa diam dan fasa gerak.Fasa geraknya berupa
campuran pelarut pengembang dan fasa diamnya dapat berupa serbuk halus yang
berfungsi sebagai permukaan penyerap (kromatografi cair-padat) atau berfungsi
sebagai penyangga untuk lapisan zat cair (kromatografi cair-cair).Fasa diam
pada KLT sering disebut penyerap walaupun berfungsi sebagai penyangga untuk zat
cair di dalam sistem kromatografi cair-cair.Hampir segala macam serbuk dapat
dipakai sebagai penyerap pada KLT, contohnya silika gel (asam silikat), alumina
(aluminium oksida), kiselgur (tanah diatomae) dan selulosa.Silika gel merupakan
penyerap paling banyak dipakai dalam KLT (Iskandar, 2007).
BAB
III
METODOLOGI
PELAKSANAAN
3.1 Alat yang digunakan :
1. Gelas ukur
2.
Batang
pengaduk
3.
Cawan
porselin
4.
Kertas saring
5.
Erlenmeyer
500 ml
6.
Beaker
glass
7.
Alumunium
foil
8.
Waterbath
9.
Corong pisah
10.
Pipet
11.
Tabung reaksi
12.
Rak tabung reaksi
13.
Lempeng KLT
14.
Bejana KLT
15.
Kaca arloji
3.2
Bahan yang digunakan :
1.
Simplisia
daun sirsak
2.
Etanol
70%
3.
Pereaksi Mayer
4.
Pereaksi Dragendrof
5.
Pereaksi Bouchardat
6.
Pereaksi Molish
7.
Pereaksi Lieberman-bouchardat
8.
Pereaksi Besi (III) klorida 1%
9.
Pereaksi Timbal (II) asetat
10.
Pereaksi Natrium hidroksida 2N
11.
Pereaksi Asam klorida 2N
12.
Pereaksi Aluminium (III) klorida 5%
13.
Pereaksi HCl 5%
14.
Aquades
15.
Metanol
16.
Tissue
3.3 Prosedur Kerja
Ditimbang
50 gram simplisia
daun sirsak
|
Di
dalam toples maserasi, ditambahkan 500 ml etanol 70% dan didiamkan 3 hari (tiap hari
digojog)
|
Disaring
ekstrak yang diperoleh dengan kertas
saring
|
Ampasnya direndam kembali dengan etanol 70% sebanyak 500ml dan didiamkan selama 1 hari,
di dalam toples maserasi
|
Disaring
ekstrak yang diperoleh dengan kertas
saring
|
Ekstrak cair yang diperoleh dikentalkan sesuai
prosedur dengan rotary
evaporator
|
Dimasukkan ke dalam botol yang telah ditimbang, lalu
ditimbang kembali botol tersebut dengan electronic balance
|
Ekstrak yang diperoleh disimpan di dalam botol
tertutup rapat dan diletakkan di tempat terlindung cahaya matahari
langsung
|
3.3.1
Ekstraksi Maserasi
3.3.2
Skrining Fitokimia
1) Pemeriksaan Alkaloida
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 gram
kemudian ditambahkan 1 ml asam klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan
di atas tangas air selama 2 menit, didinginkan lalu disaring
|
Diambil 3 tetes filtrat, lalu ditambahkan 2 tetes
pereaksi Mayer
|
Diambil 3 tetes filtrat, lalu ditambahkan 2 tetes
pereaksi Bouchardat
|
Diambil 3 tetes filtrat, lalu ditambahkan 2 tetes
pereaksi Dragendrof
|
Endapan putih atau kuning
|
Endapan coklat hitam
|
Endapan merah bata
|
Alkaloid dianggap positif jika terjadi endapan atau
paling sedikit dua atau tiga dari percobaan diatas.
|
2)
Pemeriksaan
Flavanoida
Sebanyak 10 gram
serbuk simplisia kemudian ditambahkan 100 ml air panas, dididihkan selama
5 menit
|
Sebanyak 10 gram
serbuk simplisia kemudian ditambahkan 100 ml air panas
|
Disaring dalam
keadaan panas
|
Diambil filtrat
5 ml lalu ditambahkan 0,1 gram serbuk Mg dan 1 ml HCl pekat dan 2 ml amil
alkohol, dikocok dan biarkan memisah.
|
Merah, kuning,
jingga pada lapisan amil alkohol (+)
|
3)
Sebanyak 0,5
gram sampel disari dengan 10 ml air suling. Disaring lalu filtratnya
diencerkan dengan air suling sampai tidak berwarna.
|
Diambil 2 ml
larutan lalu ditambahkan 1 sampai 2 tetes pereaksi besi (III) klorida.
|
Biru atau hijau
kehitaman (+)
|
Pemeriksaan Tanin
4) Pemeriksaan Saponin
0,5 gram sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi,
ditambahkan 10 ml air suling panas, didinginkan kemudian dikocok kuat
selama 10 detik
|
Terbentuk buih
atau busa yang selama 1 tidak kurang dari 10 menit setinggi 1-10 cm.
|
Pada penambahan
1 tetes larutan asam klorida 2 N, apabila buih tidak hilang menunjukkan
adanya saponin.
|
5)
1 gram sampel di maserasi dengan 20 ml n-heksan
selama 2 jam, lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap.
|
Pada sisa
ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat.
|
Timbul warna
ungu atau merah kemudian berubah menjadi hijau biru menunjukkan adanya
steroid triterpenoida
|
Pemeriksaan steroida/triterpenoida
6)
Serbuk
simplisia sebanyak 3 gram disari dengan 30 ml campuran 7 bagian volume
etanol 95% dan 3 bagian volume air sulung (7:3)
|
Didinginkan
dan disaring. Pada 20 ml filtrat ditambahkan 25 ml timbal (II) asetat 0,4
N
|
Direfluks selama 10 menit
|
Filtrat
disari sebanyak 3 kali, tiap kali dengan 20 ml campuran 3 bagian volume
kloroform dan 2 bagian volume isopropanolol p.
|
Pada
lapisan kloroform ditambahkan natrium sulfat anhidrat P secukupnya
disarin dan diuapkan pada temperatur tidak lebih dari 500C.
|
Dikocok,
didiamkan 5 menit, disaring
|
Dilarutkan
sisanya dengan 2 ml metanol, kemudian diambil 0,1 ml larutan percobaan
dimasukan ke dalam tabung reaksi, diuapkan di atas penangas air.
|
Pemeriksaan Glikosida
Pada sisa
ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes pereaksi Molish, ditambahkan hati-hati 2
ml asam sulfat.
|
Terbentuk cincin
warna ungu pada batas kedua cairan menunjukkan adanya ikatan gula.
|
Ekstrak
kental daun sirsak sebanyak 25 mL
|
Ditambahkan
25 mL methanol dan 75 mL aquades
|
Partisi
dengan metode cair-cair dengan pelarut n-Heksan (3x30 mL)
|
Diuapkan
sehingga didapatkan ekstrak kental n-Heksan
|
Dipartisi
dengan pelarut kloroform (3x30 mL)
|
Ekstrak
methanol-air
|
Ekstrak
n-Heksan
|
Ekstrak
etil asetat
|
Ekstrak
etanol-air
|
Ekstrak
kloroform
|
Diuapkan
sehingga didapatkan ekstrak kental kloroform
|
Ekstrak
methanol-air
|
Dipartisi
dengan pelarut etil asetat (3x30 mL)
|
Diuapkan
sehingga didapatkan ekstrak kental etil asetat
|
3.3.3
Ekstraksi Cair-Cair
Ekstrak
metanol, n-heksan, kloroform dan etil asetat diidentifikasi senyawa
metabolitsekundernya dengan metode KLT.
|
Di
atas lapisan tipis, teteskan zat yang akan dikromatografikan dengan pipa
kapiler, pada jarak kira-kira 1 cm
dari bagian bawah kaca. Untuk plat yang kecil noda berupa titik sedang
plat yang sedang plat yang besar ,
20 x 20 cm berupa deretan titik-titik sehingga membentuk garis. Biarkan
beberapa saat hingga kering.
|
Lapisan
tipis yang mengandung cuplikan dimasukkan dalam suatu bejana yang berisi
fasa bergerak.(Untuk lapisan tipis yang kecil dapat ditempatkan dalam
gelas piala).Bagian yang mengandung cuplikan dicelupkan dalam fasa
bergerak, noda jangan sampai tercelup dalam pasa bergerak.
|
Setelah
fasa bergerak naik sampai hampir ujung atas lapisan, lapisan tipis diambil
dari bejana/gelas piala. Untuk plat kecil, batas fasa bergerak dan
noda-noda diberi tanda. Biarkan kering di udara.
|
Untukmengetahui
lokasi dari noda(bila noda tidak kelihatan), makasetelah lapisantipis
kecil kering dimasukkan dalam gelas piala yang di dalamnya telah diberi
kristalyood.
|
Tentukan
harga Rfuntuk lapisan tipis yang kecil
|
Penanganan
plat yang besar selanjutnya.Bila dikehendaki untuk mendapatkan hasil
pemisahan, maka pita-pita yang merupakan komponen-komponen senyawa
masing-masing dikeruk dan dikumpulkan secara terpisah.Tiap-tiap bagian
dicuci dengan kloroform yang kemudian perlu diuji lebih lanjut, dengan menggunakan
lapisan tipis, untuk mengetahui apakah masing-masing bagian merupakan
komponen tunggal atau masih merupakan campuran.
|
3.3.4
Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
BAB
IV
HASIL
DAN PEMBAHASAN
4.1 Ekstraksi Maserasi
Tujuan
Dilakukan percobaan ekstraksi adalah untuk memperoleh ekstrak etanol dari daun
sirsak yang selanjutnya akan digunakan dalam praktikum berikutnya. Ekstraksi
adalah proses penarikan senyawa aktif dari suatu simplisia menggunakan pelarut
tertentu, dimana ektraksi memiliki prinsip umum yaitu difusi dan osmosis. Pada
praktikum ini digunakan metode maserasi karena tekstur sampel yang kami miliki
bertektur lunak, dan hasil ekstrak yang diperoleh dari maserasi lebih banyak
dari metode lainnya.
Ekstraksi merupakan pemisahan suatu zat aktif dari campuran dengan
pembagian sebuah zat terlarut antara dua
pelarut yang tidak dapat tercampur untuk mengambil zat terlarut tersebut dari
satu pelarut ke pelarutan yang lain. Maserasi adalah salah satu jenis metode
ekstrasi dengan sistem tanpa pemanasan atau dikenal dengan istilah ekstrasi
dingin. Ekstraksi senyawa bahan alam digunakan dengan menggunakan teknik
maserasi, yaitu suatu teknik ekstraksi dingin dengan cara merendam sampel bahan
alam dengan menggunakan pelarut yang sesuai.
Pada
percobaan ini untuk penyarian zat aktif, dilakukan dengan cara merendam serbuk
simplisia dalam cairan penyari selama 2 jam dengan modifikasi pengadukan
sebanyak 2 kali. Digunakan sampel bahan alam berupa daun sirsak, karena menurut
teori di dalam daun sirsak tersebut terkandung metabolit sekunder berupa
berpotensi untuk dikembangkan dan dilakukan penelitian lebih lanjut.. Hal yang
pertama dilakukan adalah daun sirsak yang akan digunakan dicuci hingga
bersih lalu daun ditimbang bobot basahny. Kemudian dijemur selama 3 hari
dibawah matahari tidak langsung dengan cara diletakkan di bawah sinar matahari
langsung dan ditutup kain hitam, tujuan dari penjemuran dibawah sinar matahari
tidak langsung adalah agar metabolit sekunder yang terdapat daun sirsak tidak
rusak karena terkena cahaya matahari langsung. Selanjutnya dihaluskan dengan
cara blender menjadi serbuk dimaksudkan untuk memperkecil ukuran partikel
sehingga luas bidang sentuh semakin banyak supaya saat pelarutan dengan
alkohol, ekstrak yang diperoleh lebih maksimal.
Etanol digunakan sebagai pelarut karena etanol
termasuk ke dalam pelarut polar, sehingga sebagai pelarut diharapkan dapat
menarik zat-zat aktif yang juga bersifat polar. Etanol digunakan sebagai cairan
penyari karena lebih selektif, kapang dan khamir sulit tumbuh dalam etanol 20%
ke atas, tidak beracun, netral, dan etanol dapat bercampur dengan air pada
segala perbandingan, serta panas yang diperlukan untuk pemekatan lebih rendah.
Etanol dapat memperbaiki stabilitas bahan obat terlarut dan tidak mengakibatkan
pembengkakan membran sel. Keuntungan lainnya adalah sifatnya yang mampu mengendapkan albumin dan menghambat kerja
enzim. Umumnya yang digunakan sebagai cairan pengekstraksi adalah campuran.
Setelah
peralatan maserasi dan bahan-bahan yang akan digunakan telah siap, selanjutnya
dilakukan proses maserasi. Pertama dilakukan penimbangan serbuk
simplisia sebanyak 50 gram kemudian dimasukan ke dalam toples kaca, lalu
ditambakan 500 ml etanol 70% dan diaduk selama 2 jam dengan alat pengaduk
otomatis kecepatan 60 rpm.
Digunakan pelarut etanol 70% karena pelarut etanol 70% adalah pelarut yang paling sempurna dalam
melarutkan metabolit sekunder yang ada pada sampel daun sirsak karena etanol
70% adalah etanol air sehingga senyawa metabolit sekunder dalam daun sirsak
yang larut air maupun yang larut lemak dapat tertarik. Maserasi dilakukan
selama 2 jam dengan kecepatan 60 RPM, kecepatan ini digunakan karena sesuai
dengan ukuran dan jumlah cairan maserasi yang digunakan. Selanjutnya menyaring
hasil rendaman sampel tersebut dengan menggunakan kain kasa agar endapan yang
ada pada sampel daun sirsak tidak ikut ke dalam ekstrak cair daun sirsak yang
disaring. Setelah proses pertama maserasi dilakukan, kemudian ampas hasil
maserasi dimaserasi kembali dengan proses yang sama. Hasil maserat yang
didapatkan sebanyak 1000 ml ekstrak cair daun sirsak.
Setelah
didapatkan ekstrak daun sirsak yang cair, selanjutnya dipanaskan di atas
penangas air yang bertujuan untuk menguapkan sehingga akan terpisah antara pelarut
etanol yang digunakan dengan ekstrak daun sirsak kental yang diperoleh. Dari
hasil percobaan tersebut didapatkan ekstrak kental daun sirsak sebanyak 25 mL.
Keuntungan dari maserasi yaitu mudah dan
sederhana, selain itu hasil yang diperoleh juga banyak, sedangkan kerugiannya
yaitu membutuhkan banyak pelarut, membutuhkan waktu yang lama dan penyariannya
kurang sempurna.
4.2 Skrining Fitokimia
No
|
Uji
|
Pereaksi
|
Teori
|
Hasil
|
+/-
|
1
|
Alkaloid
|
Pereaksi mayer
|
Endapan putih/kuning
|
Endapan kuning
|
+
|
Pereaksi Bouchardad
|
Endapan coklat-hitam
|
Endapan coklat hitam
|
+
|
||
Pereaksi dragendrof
|
Endapan merah bata
|
Endapan merah bata
|
+
|
||
2
|
Flavonoid
|
Serbuk Mg, HCl Pekat dan Amil alcohol
|
Amil alcohol warna merah, kuning,jingga
|
Amil alcohol warna kuning
|
+
|
3
|
Tanin
|
Pereaksi besi (III) klorida
|
Biru atau hijau kehitaman
|
Hijau kehitaman
|
+
|
4
|
Saponin
|
Peraksi HCl 2N
|
Terbentuk buih/ busa tidak hilang
|
Terbentuk buih
|
+
|
5
|
Glikosida
|
Pereaksi Molish dan asam sulfat
|
Terbentuk cincin warna ungu
|
-
|
-
|
6
|
Steroida
|
Asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat
|
Menjadi hijau biru
|
Hijau biru
|
+
|
Skrining fitokimia atau penapisan kimia adalah tahapan awal untuk
mengidentifikasi kandungan kimia yang terkandung dalam tumbuhan, karna pada
tahap ini kita bisa mengetahui golongan senyawa kimia yang terkandung tumbuhan
yang sedang kita uji/teliti. Metode yang digunakan dalam pengujian ini adalah reaksi
warna dan pengamatan terbentuknya endapan. Dari proses skrining fitokimia ini,
pengujian menghasilkan data bahwa ekstrak positif
mengandung senyawa golongan alkaloid melalui uji pereaksi
Meyer yang menghasilkan reaksi terbentuknya endapan kuning dan sesuai dengan
teori, Bourchadad yang menghasilkan reaksi terbentuknya endapan coklat-hitam
dan sesuai dengan teori, serta Dragendrof yang menghasilkan reaksi terbentuknya
endapan merah bata dan sesuai dengan teori. Pengujian selanjutnya positif
mengandung senyawa golongan flavonoid melalui uji pereaksi Serbuk Mg, HCl Pekat dan Amil alcohol yang
menghasilkan dimana amil alcohol berwarna kuning dan sesuai dengan teori. Positif
mengandung senyawa golongan saponin karena pada uji pereaksi
HCl 2N menghasilkan reaksi terbentuknya buih dan sesuai dengan teori, positif
mengandung senyawa golongan tannin melalui uji pereaksi FeCl3
yang menghasilkan reaksi terbentuknya warna hijau kehitaman dan sesuai
dengan teori, positif mengandung senyawa golongan
steroida melalui uji pereaksi Asam asetat anhidrat
dan asam sulfat pekat yang menghasilkan reaksi warna menjadi
hijau biru dan sesuai dengan teori. Sedangkan pada pengujian senyawa glikosida
tidak dilakukan.
4.3 Partisi Cair-Cair
Ekstraksi
cair-cair adalah proses pemisahan zat terlarut di dalam 2 macam zat pelarut
yang tidak saling bercampur atau dengan kata lain perbandingan konsentrasi zat
terlarut dalam pelarut organik dan air. Hal tersebut memungkinkan karena adanya
sifat senyawa yang dapat terlarut dalam air dan ada pula senyawa yang dapat larut dalam pelarut organik.
Dalam percobaan ini sampel yang digunakan adalah ekstrak
etanol daun sirsak. Percobaan pertama dilakukan pencampuran antara ekstrak
etanol daun sirsak sebanyak 25 mL dan n-heksan sebanyak 30 mL menggunakan corong pisah. Kemudian
di kocok beberapa menit, fungsi pengocokan ini agar larutan n-Heksan tersebut
dapat bercampur dengan ekstrak etanol daun sirsak, sehingga terbentuk 2 fase
dari cairan tersebut. Diamkan beberapa menit agar terjadi dua pemisahan yaitu lapisan organik dan
lapisan ekstrak. Dalam proses pemisahan ini, senyawa yang bersifat nonpolar
akan berada dalam fase bawah sedangkan senyawa yang bersifat polar berada dalam
fase atas. Ini didasarkan oleh suatu penyataan bahwa suatu senyawa polar akan larut
pada pelarut nonpolar sedangkan senyawa polar akan larut pada pelarut nonpolar atau sering disebut dengan istilah like dissolved like. Dimana terdapat lapisan bagian atas adalah n-heksan dan
lapisan bawah adalah ekstrak etanol daun sirsak. Hal ini terjadi karena adanya perbedaan berat jenis
antara etanol dan n-heksan. Berat jenis n-heksan lebih kecil yaitu
0,654 g/mL sedangkan berat
jenis etanol 0,798 gram/mL. Kemudian
lapisan ekstrak daun sirsak ditampung dalam Erlenmeyer dan ekstrak n-Heksan
yang didapat juga ditampung dalam Erlenmeyer yang berbeda. Percobaan ini
dilakukan sebanyak 3 kali.
Selanjutnya
ekstrak etanol daun sirsak yang digunakan setelah proses pencampuran dengan
n-heksan digunakan dalam fraksi partisi dengan kloroform. Pada pencampuran
antara ekstrak etanol daun sirsak sebanyak 35 mL dengan kloroform sebanyak 30 mL, fungsi penambahan
kloloform adalah sebagai pelarut non
polar dan merupakan larutan yang mudah menguap sehingga sampel ekstrak tersebut
tidak larut atau tidak beraksi dengan kloroform. Kemudian di kocok beberapa
menit, fungsi pengocokan ini agar larutan kloroform tersebut dapat bercampur
dengan ekstrak etanol daun sirsak, sehingga terbentuk 2 fase dari cairan
tersebut. Diamkan beberapa menit agar terjadi
dua pemisahan yaitu lapisan organik dan lapisan ekstrak. Pada corong pisah lapisan berada pada lapisan bawah kloroform
dan ekstrak daun sirsak pada lapisan atas. Hal ini terjadi karena adanya perbedaan berat jenis
antara etanol dan kloroform. Berat jenis etanol lebih kecil yaitu 0,798 gram/mL sedangkan berat jenis kloroform adalah 1,474 g/mL
sampai 1,479 g/mL. Kemudian lapisan ekstrak daun sirsak ditampung
dalam Erlenmeyer dan ekstrak kloroform yang didapat juga ditampung dalam
Erlenmeyer yang berbeda. Percobaan ini dilakukan sebanyak 3 kali.
Selanjutnya dilakukan pencampuran ekstrak daun
sirsak dengan etil asetat. Pada pencampuran antara ekstrak etanol
daun sirsak sebanyak 35 mL
dengan etil
asetat sebanyak 30 mL. Kemudian di kocok beberapa menit, fungsi pengocokan ini
agar larutan etil asetat tersebut dapat bercampur dengan ekstrak etanol daun
sirsak, sehingga terbentuk 2 fase dari cairan tersebut. Diamkan beberapa menit
agar terjadi dua pemisahan yaitu lapisan
organik dan lapisan ekstrak. Dimana pada corong pisah
terdapat lapisan ekstrak daun sirsak pada bagian atas dan etil asetat pada bagian bawah. Hal ini terjadi karena adanya perbedaan berat jenis
antara etanol dan etil asetat. Berat jenis etanol lebih kecil yaitu 0,798 gram/mL sedangkan berat jenis etil asetat 0,8945 gr/ml. Kemudian lapisan ekstrak daun sirsak ditampung
dalam Erlenmeyer dan ekstrak etil asetat yang didapat juga ditampung dalam
Erlenmeyer yang berbeda. Percobaan ini dilakukan sebanyak 3 kali.
Setelah itu pelarut yang sudah mengandung
ekstrak diuapkan untuk mendapatkan ektrak yang bersifat polar dan nonpolar yang kemudian akan diuji dengan
metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) untuk mengidentifikasi senyawa-senyawa
yang terdapat dalam fase polar dan dalam fase nonpolar.
4.4 KLT (Kromatografi Lapis Tipis)
Kromatografi adalah suatu metode pemisahan fisik, dimana
komponen yang dipisahkan terdistribusi dalam 2 fase. Salah satu fase tersebut
adalah suatu lapisan stasioner dengan permukaan yang luas yang lainnya seperti
fluida yang mengalir lembut disepanjang landasan stasioner. Ketika pita
tersebut melewati kolom, pelebaran disebabkan oleh rancangan kolom dan kondisi
pengerjaan dan dapat diterangkan secara kuantitatif dengan pengertian jarak
dengan teori kolom adalah jantung kromatografi, pemisahan sesungguhnya komponen
dicapai dalam kolom.
Dalam teknik kromatografi, senyawa dapat dipisahkan menjadi
komponennya berdasarkan pendistribusian zat antara 2 fase, yaitu fase
diam(stasioner) dan fase gerak (mobil). Azas penting dalam kromatografi adalah
bahwa senyawa yang berbeda mempunyai koefisien distribusi yang berbeda. Senyawa
yang berinteraksi lemah dengan fase diam akan bergerak lambat. Sebagian fase
diam digunakan silika gel (SiO2.H2O). Permukaan bahan ini
memiliki kemampuan untuk menjerap senyawa organik.
Langkah pertama yang dilakukan dalam percobaan kromatografi
lapis tipis adalah menyiapkan plat silica gel sebagai fase diamnya yang
memiliki panjang 10 cm dan lebar 5 cm. Kemudian diberi tanda dibawah dan diatas
plat silica gel sebagai batas jarak tempuh noda (senyawa) setinggi 1 cm. Hal
ini dilakukan untuk memudahkan praktikan dalam mengukur jarak tempuh noda. Dan
disiapkan eluen yang terdiri dari asam asetat, air dan butanol sebagai fase
geraknya yang sebelum digunakan terlebih dahulu dijenuhkan dengan menggunakan
kertas saring hingga eluen naik sampai ke ujung atas kertas saring.
Lalu ditotolkan ekstrak etanol daun sirsak, fraksi n-Heksan,
fraksi kloroform dan fraksi etil-asetat pada plat silica gel dengan menggunakan
pipa kapiler yang masing-masing noda diberi jarak sepanjang 1 cm. Setelah itu
dimasukkan ke dalam chamber yang telah berisi eluen (fase gerak) dan didiamkan
hingga eluen menempuh batas atas plat. Dan diamati dan diukur jarak noda
(senyawa) dengan bantuan sinar UV.
Dari hasil pengukuran maka dihitung Rf
(Retention factor) masing-masing noda atau senyawa.
Data 1
Rf1 =
=
=
0,68
Rf2 =
=
=
0,7
Rf3 =
=
=
0,72
Data 2
Rf1 =
=
=
0,67
Rf2 =
=
=
0,69
Rf3 =
=
=
0,73
Keterangan
: Rf1 = ekstrak kental daun sirsak; Rf2 = fraksi etil
asetat; Rf3 = fraksi kloroform.
Pada analisis Rf, data yang
diambil adalah dengan jarak noda lebih atau paling mendekati batas atas. Nilai
Rf1 yaitu ekstrak etanol daun sirsak data 1 sebesar 0,68 dan data
data 2 sebesar 0,67 ini membuktikan bahwa sifat eluen yang non polar lebih
mudah termigrasi pada bahan fase diam seperti silika gel yang polar. Urutan
campuran eluen berdasarkan kenaikan nilai Rf2 yaitu fraksi etil
asetat data 1 sebesar 0,7 dan data 2 sebesar 0,69; nilai Rf3 yaitu
fraksi kloroform data 1 sebesar 0,72 dan data 2 sebesar 0,73. Perbedaan
jarak yang ditempuh zat terlarut disebabkan
karena dipengaruhi oleh kepolaran masing-masing tinta tersebut sehingga harga Rf
yang dihasilkan juga berbeda.
Untuk fraksi n-Heksan tidak
terlihat jarak tempuh noda (senyawa) dikarenakan terjadi kesalahan saat proses
penguapan fraksi n-Heksan terlalu kering sehingga ditambahkan dengan 3ml
n-Heksan sehingga membuat konsentrasi senyawa yang ada di dalam fraksi n-Heksan
sebelumnya menjadi berkurang yang membuat tidak terlihatnya noda pada plat
silica gel (fase diam).
BAB V
PENUTUP
A.
Kesimpulan
Dari praktikum yang
dilakukan oleh praktikan dapat disimpulkan bahwa :
1.
Senyawa metabolit sekunder yang
teridentifikasi dari ekstrak daun sirsak (Annona muricata L)
melalui reaksi warna yaitu senyawa golongan alkaloid, flavonoid, tannin
dan steroid.
2.
Proses ekstraksi metabolit sekunder dari
daun sirsak (Annona muricata L.)
dengan
beberapa metode ekstraksi maserasi menghasilkan ekstrak cair sebanyak 1 L.
3.
Pemisahan (partisi) senyawa metabolit
sekunder yang terkandung dalam ekstrak berdasarkan pada perbedaan kepolaran
pelarut dengan metode ekstraksi cair-cair. Menghasilkan fraksi n-Heksan, Etil
Asetat, Kloroform dan ekstrak kental.
4.
Proses Kromatogrfi Lapis Tipis (KLT)
menghasilkan 3 noda dari 4 fraksi yang ditotolkan, dimana fraksi n-Heksan tidak
menghasilkan noda, fraksi Etil Asetat menghasilkan Rf = 0,7 (data 1) dan 0,69
(data 2), fraksi Kloroform 0,72 (data 1) dan 0,73 (data 2), ekstrak kental 0,68
(data 1) dan 0,67 ( data 2).
B.
Saran
Diharapakan untuk
praktikum selanjutnya dapat menggunakan tanaman/tumbuhan yang lainnya, serta
dapat menggunakan metode ekstraksi dan identifikasi senyawa yang lainnya untuk
pengembangan ilmu pengetahuan sehingga dapat menambah wawasan mahasiswa.
DAFTAR
PUSTAKA
Burhan Nurgiantoro, Gunawan &
Marzuki. 2002.Statistik Terapan
Untuk Penelitian Ilmu Sosial. Gadjah Mada
University Press. Yogyakarta.
Dirjen POM Departemen Kesehatan
Republik Indonesia. (1979). Farmakope
Indonesia, Edisi III. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Depkes
RI.1986. Sediaan Galenik.
Depatermen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta.
Farnsworth,
N.R. 1966. Biological and Phytochemical Screening of Plants.Journal
ofPharmaceutical Sciences.Volume 55. No.3. Chicago: Reheis Chemical
Company. Pages 263-264.
Harborne,
J.B. (1987). Metode Fitokimia. Penerjemah: Kosasih Padmawinata dan Iwang
Soediro. Bandung: Penerbit ITB. Hal 71, 76, 84-85, 96-97, 99, 102 dan 147.
Iskandar,
Yusuf. 2007. Karakteristik Zat Metabolit
Sekunder Dalam Ekstrak Bunga Krisan (Chrysanthemum cinerariaefolium) Sebagai
Bahan Pembuatan Biopestisida.FMIPA. Semarang.
Kristianti, A. N, N. S. Aminah, M. Tanjung, danB.
Kurniadi. 2008. Buku Ajar Fitokimia.Surabaya:
Jurusan Kimia LaboratoriumKimia Organik FMIPA UniversitasAirlangga. P.47-48.
Lide,
David. 2001. Handbook of Chemistry And
Physic. Copyright CRC Press LLC.
Robinson,
T. (1995).Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Penerjemah: K. Padmawinata,
K. Edisi IV. Bandung: ITB Press. Hal 191, 196, 197.
Rohman,. A,. 2009. Kromatografi untuk Analisis Obat. Graha Ilmu. Yogyakarta.
Rudi,L.
2010. Penuntun Dasar-Dasar Pemisahan
Analitik. Universitas Haluoleo. Kendari.
Speight,
James. G. 2006. The Chemistry and
Technology of Petroleum. Taylor & Francis Group, LLC.
Sukarmin.
2004. Materi dan Perubahannya.
Direktorat Pendidikan Menegah Kejuruan. Direktorat Jendral Dasar dan
Menegah.Departemen Pendidikan Nasional.
Yazid,. E,.2005. Kimia Fisika untuk Paramedis.Andi.Yogyakarta.
Posted in: Laporan
0 komentar:
Posting Komentar